Western Blot: Was passiert mit meiner Probe?

Monitoring von Gesamtprotein und Targetnormalisierung

Der immunochemische Nachweis von Proteinen mittels Western Blot Analyse funktioniert über eine Abfolge von verschiedenen Arbeitsschritten: Proteinextraktion, Trennung, Transfer, Blocking, AK-Inkubationen, Waschschritten, Nachweis eines spezifischen Proteins (Target).

Da die Proteine der Proben nicht zu 100% aus dem Gel auf die Membran transferieren und auch nicht kovalent auf der Western Blot Membran gebunden sind, geht jeder Arbeitsschritt mit einem Verlust an Protein einher (siehe Abbildung). Der Proteinverlust hat verschiedene Ursachen (z.B. Hydrophobie, mechanische Scherkräfte,...).

Valide Normalisierung von Western Blots

Um vertrauenswürdige Aussagen über die Proteinexpression eines Targets zwischen verschiedenen Proben zu bekommen (quantitativer Western Blot), bedarf es einer validen Möglichkeit zur Normalisierung. Zum Zeitpunkt des Targetnachweises muss bestimmt werden, wieviel korrespondierendes Gesamtprotein sich tatsächlich noch auf der Membran befindet.

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Patentierte SPL Technologie

SPL Kits machen die Menge an Gesamtprotein jeder Probe zu jedem Zeitpunkt des Western Blots nachweisbar. Die Sensitivität ist dabei ungleich höher, als bei allen anderen am Markt angebotenen Verfahren. SPL basiert auf fluoreszierenden SPL-Farbstoffen, die der Probe vor der elektrophoretischen Trennung zugegeben werden. Abhängig von den Probeneigenschaften kann in zwei verschiedene Workflows unterschieden werden.

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NEU SPL EASY workflow
Stark vereinfachte Anwendung des SPL Kits bei einer  Menge von 25μg - 75μg extrahiertem Gesamtprotein pro Probe möglich.

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SPL ADVANCED workflow
SPL Kit Anwendung für Proben mit geringer Proteinmenge (weniger als 25µg Gesamtprotein pro Probe), besonderen Pufferzusammensetzungen oder Anforderungen an Step-by-Step-Monitoring während des Western Blots.

Sowohl der easy als auch der advanced workflow ermöglichen präzises Transfer-Monitoring und Experiment-zu-Experiment Vergleiche.